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复合中药提取物对褐篮子鱼生理代谢及抗 氧化酶活性影响的研究

发布时间:2022-08-10 15:19
我国自改革开放以来,社会经济水平不断提升,人们的生活水平也越来越高,消费需求持续丰富,对渔业资源的需求逐渐增加,而水产养殖领域是渔业资源最核心的供应渠道,整体规模也在不断扩大,全球的水产养殖业正在经历量变到质变的过程,由资源扩张型向资源养护和综合利用型转变,环境友好和高效高品质渔业生产成为发展潮流。在养殖生产上,鱼类生长很容易受到外界环境影响,温度、盐度、饲养密度、溶氧、水质等环境因素是造成鱼类应激主要的胁迫因子,其中温度是直接影响鲢、鳙鱼体内转氨酶活性的主要因素,酶活性会随着温度增长而增强,同时鱼体血液红细胞的数量也会受到温度的影响,其数量会随温度变化而发生波动。另外盐度也是鱼类生长过程主要的因素影响,尤其对仔鱼期的影响作用较为显著。而养殖密度对于鱼类生长同样会形成一定的影响作用,密度过大出现一系列缺氧等问题。粪便排放量是影响养殖环境的重要因素,如果排放量太大,往往会影响水体质量,使得水体的透明度下降,溶氧降低,水质发生变化,甚至出现污染现象;而个体的不断变化会使得空间、饵料层面形成竞争现象,进而引起鱼类拥挤胁迫效应,导致鱼长时间保持在应激状态中等,最终会导致鱼类的免疫机能降低,进而出现感染风险,引发各类疾病。如果水体的pH 值较低会对鱼类胚胎发育、耗氧代谢以及血液酸碱平衡等产生一定的影响作用,同时也会引发鳃和肝组织超氧化物歧化酶活性的升高。如果水体中的氨氮含量过高时,往往会使得鳃丝发生扭曲、鳃上皮增生、鳃丝粘连等,另外还可以引起肝组织松软、易破碎、肝实质细胞的细胞质减少等现象,严重者可能引起空泡化。一般情况下,在运输过程中鱼类容易出现很多问题,从捕捞、运输、卸载整个环节当中,鱼的机能和组织结构发生了较大的改变,容易使得鱼体发生局部或全身性病变,严重时会导致死亡;在面对环境改变、剧烈震荡、低氧胁迫等各种外界因素的作用下,使得鱼体可以通过抑制免疫机能,提高了机体对病原菌的易感性,使得鱼体的发病率和死亡率进一步提升。所以,适合鱼体的代谢调节及免疫抗应激的药物,可将其使用于养殖生产方面,能够优化我国水产养殖行业,保障我国养殖业可持续健康发展。褐篮子鱼(Siganus fuscescens)属于广盐、广温、植食性为主的杂食性鱼,对于藻类的摄入量较高,同时摄入藻类的效率较高,因此对于生态修复起到了重要作用,但褐篮子鱼抗应激能力较弱,在外界环境刺激时反应强烈,本文主要以褐篮子鱼作为研究对象,探索中药提取物对褐篮子鱼生理代谢及抗氧化酶活力的影响。
 
复合中药提取物对褐篮子鱼生理代谢及抗氧化酶活性影响的研究
1 褐篮子鱼概况
褐篮子鱼(Siganus fuscescens),又名臭肚、象鱼、泥鯭等,其属于鲈形目(Perciformes)、刺尾鱼亚目(Acanthuroidei)、篮子鱼科(Siganidae),篮子鱼属(Siganus),生活在热带和亚热带近海区域,主要集中于珊瑚岩礁区或浅水区,我国主要分布于西沙、南沙以及台湾海域,主要栖居于珊瑚礁、岩礁等暖水水域。褐篮子鱼因为头部跟兔子相似,又有兔鱼的叫法[1-3]。褐篮子鱼吻三角形突出,不形成吻管,前端圆钝。身上部呈橄榄绿色或褐色,下部为银白色;受环境影响,体色多变,体侧为浅褐色、深褐色和白色斑点的混合色,并形成数条颜色深浅不一的条带。褐篮子鱼为杂食性鱼类,多以群体形式生活,在自然海域中多以岩礁上生长的藻类为食[4]。褐篮子鱼喜欢群体游动、性情温和,可做观赏鱼饲养,又因其杂食性,可以和多数鱼类混养,清理养殖水体生长的藻类以及其他生物的残饵,素有“清道夫”的美誉[5,6],冯鹏等[7]在网箱养殖研究中发现,在网箱中混养一定比例的篮子鱼能够降低清洗网箱成本,减少鱼类发病率,提高饵料利用率,进而达到更高的经济效益以及生态效益。除了作为观赏和清洁鱼类,褐篮子鱼还作为食用鱼深受人们的喜爱,不仅营养丰富、肉质鲜美,还具有少刺的特点;庄平等[8]研究表明,篮子鱼肌肉营养成分共有 18 种氨基酸,占干重
68.33%,其中8 种为人体必需氨基酸,还有4 种鲜味氨基酸,并含有丰富的微量元素锌和硒。Shuqi Wang 等[9]研究发现,篮子鱼富含二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸和花生四烯酸等多种高度不饱和脂肪酸。Limbu 等[10]研究发现,鱼类不饱和脂肪酸具有降低血脂、血压、抑制血小板凝集、抗肿瘤等改善人体健康功效和免疫调节的作用。篮子鱼性成熟约为2 年,繁殖季节在每年3 至5 月,目前已实现人工育苗,但尚未商业化,常见的篮子鱼主要捕捞自自然海域,捕捞方法以驱赶和药物刺激为主。篮子鱼普遍抗应激能力较弱,在外界环境刺激时反应强烈,应激时背鳍张开,高密度运输时容易形成外伤,且背鳍具有毒腺,捕捞时易扎伤。

2 鱼类免疫抗应激研究进展
2.1 常见免疫抗应激药物目前,国际上在渔业生产和科学研究中对渔用抗应激药物的应用极为广泛[11]。根据药
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第一章 绪论
物抗应激机理可分为:a)调节中枢神经系统,b)抗氧化、清除活性氧自由基,c)调节物质代谢。根据药物使用情况可分为:a)应激预防类:削弱应激因素对机体的作用,如丁香酚、MS-222 等; b)促适应类:提高机体的防御力,能缓和调节刺激,如氨基酸、有机酸、维生素等; c)对症药物:对抗应激症状的药物,如电解质类、糖类及抗生素类。大多数国家使用麻醉剂进行水产品保鲜,其中包括了 MS-222、丁香酚、盐酸苯佐卡因、液态二氧化碳、苯唑卡因、苄咪甲酯、喹哪啶、2-苯氧乙醇等近三十余种药物,但大部分麻醉剂都因其安全隐患、成本或其他缺陷而没有得到较好的应用[12]。 这些麻醉剂均可用于运输、常规操作和外科手术之前对鱼的镇定或麻醉。麻醉剂的精确剂量因鱼麻醉目标阶段、种类、体质量、健康状况、年龄、生长阶段以及水质而异,对特定剂量的耐受性在种之间差异较大。水质参数,如温度、pH 值、盐度和硬度会影响代谢率;酸碱调节、渗透调节和离子调节这些因素也会影响麻醉剂的药物动力学。因此,每次麻醉前要用相同规格的鱼做预试验,观察和记录此规格的鱼在麻醉后的反应特征,以确保所使用的麻醉剂安全、有效、浓度适合,才可进行正式麻醉。高耗氧鱼类对麻醉剂较为敏感,通常使用低浓度处理,如鲑、鳟,反之则然,如鲤等[13]。对绝大多数鱼类麻醉方式是通过药浴进行麻醉,或用麻醉液连续灌鳃。目前,水产领域使用最多的抗应激药物是 MS-222 和丁香酚类化合物,其他药物有维生素 C、苯氧乙醇和谷氨酰胺等。
2.1.1 MS-222
MS-222,俗称鱼安定、三卡因等,化学名称为间氨基苯甲酸乙酯甲烷磺酸盐,由于其具有脂溶性,这使其易于游离到细胞膜中与 Na+通道结合,抑制 Na+通过神经细胞膜而限制了神经膜的兴奋性,因此抑制神经系统,是目前世界上最常用的渔用麻醉剂[14-16]。鱼类通过鳃丝和体表吸收 MS-222,并且快速进入至血液中,再通过血液循环到达神经中枢,进而使得鱼体活动和反射能力受到抑制,最终导致呼吸和血液循环处于极度缓慢状态。MS-222 是苯佐卡因(Benzocaine)的一种异构体,易溶于水,因为具有额外的磺酸根,所以其溶液具有酸性[17],因此,需要使用碱性缓冲剂中和其酸性,以避免引起代谢性酸血症[18]。MS-222 是美国食品和药物管理局(FDA)唯一批准的用于食用鱼的麻醉剂[19],而且在英国、加拿大、意大利、西班牙和挪威只有注册兽医才能处方使用[18,20],MS-222 通常用于鱼的非侵入性操作和外科手术,也被作为大多数试验鱼安乐死的第一步[21],若是用于食用鱼时必须经过足够的退药期才能进入市场,例如美国规定 21d 退药期[19]、加拿大规定 50度日退药期[22]和英国规定 70 度日退药期[23]。鱼通过鳃和皮肤(血管发达的无鳞鱼)吸收
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复合中药提取物对褐篮子鱼生理代谢及抗氧化酶活性影响的研究MS-222,然后作用全身于[14,24,25]。MS-222 一旦进入鳃,紧接着就会进入血液系统,并在 1-3分钟内在血液中达到峰值,随后分布于全身[26]。随后,MS-222 通过乙酰化反应迅速代谢并排出体外[16]。MS-222 及其非极性代谢物主要排泄途径是通过鳃[27];未代谢的 MS-222及其更多极性代谢物通过肾脏排泄。MS-222 在血液中的半衰期估计为 1.5-4h,8h 和 24h后,MS-222 分别在鱼的全血液和尿液中检测不到[28]。类似于 MS-222 的麻醉剂(如 2-苯氧基乙醇,苯佐卡因,丁卡因和利多卡因)的麻醉效应可随温度降低显着增加[15,29]。虽然药物代谢动力学在鱼类中进行研究较少,但可以明确的是在较低温度下药物代谢动力学的变化以及扩散速率的减慢会降低神经部位的药物清除率[28]。
2.1.2 丁香酚
丁香酚(Eugenol)是丁香(Syzygium aromaticum)的叶、芽和茎提取物,具有杀菌消毒、抗氧化和麻醉镇痛等作用[30-32]。美国 FDA 将丁香酚列入食品安全(GRAS)清单[33],作为食品添加剂使用,而在中国通常作为牙科镇痛剂使用。早期,远藤通过大量的实证研究,总结出丁香酚可以对几种淡水鱼产生麻醉作用[34],随后丁香酚被当做鱼虾替代麻醉剂在业界广泛应用[35-38]。丁香酚属于不易溶于水的物质,一般在使用过程中,用乙醇或洗涤剂进行溶解后方可使用。丁香酚已经在美国、加拿大、英国等地区禁用,但澳大利亚、智利、芬兰、新西兰等地区仍然属于合法鱼类专用麻醉剂,但使用过的鱼需要一定的休药期才可以上市[39],此外,日本批准 10%的丁香酚可做渔用麻醉剂,但要经历 7 天及以上的休药期[40]。血液中促肾上腺皮质激素和皮质醇水平反映了鱼类应激状态,吕海燕等[41]研究表明,其浓度在麻醉前比麻醉后高,表明丁香酚能有效缓解鱼类的应激状态。Pirhonen 等
[42]使用丁香酚将虹鳟鱼、鲑鱼麻醉后,血浆中皮质醇浓度变化不显著,因而认为丁香酚是一种安全有效和具有缓解应激压力的麻醉剂。根据丁香酚在罗非鱼体内的药物代谢动力学研究发现,在 0-1h 内,丁香酚在肝脏中的质量浓度逐渐升高,在 1h 达到峰值,之后浓度逐渐降低[43]。
2.1.3 其他
维生素C影响不饱和脂肪酸的过氧化限制胆固醇的生成,降低皮质醇的含量,维生素C 能有效参与鱼类应激时肾上腺皮质激素的分泌,另外还可以消除应激因素导致的体内代谢产物,消除的大量活性自由基,保护体内生物膜,防止其受到损伤。另一方面,维生素C 能够降低血液中糖皮质激素分泌量,同时能够抑制环腺营酸含量,进而保护和增强机体
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第一章 绪论
免疫功能。
2-苯氧乙醇多以局部麻醉药物使用,属于无色、油状、略带芳香味液体,其价格便宜,入麻时间短,鱼类可迅速复苏,其溶液具有杀菌作用,在鱼类麻醉运输过程中能降低排氨率,被广泛应用于鱼体麻醉[15]。通常情况下,该药物的药效作用时间较长,鱼体在复苏后3 d 后,药效还无法消除,如果反复使用该药物,会使得鱼体出现耐受性。另外,该药还有一定的副作用,会对鱼体细胞膜产生刺激作用,可以进一步降低血液pH、增加血液葡萄糖水平[16]。谷氨酰胺属于机体快速分裂细胞的能量源头,可以帮助肠道和免疫系统健康持续运行,保持其正常形态和功能。谷氨酰胺与应激及疲劳的产生有密切关系,机体疲劳时,谷氨酰胺水平下降,抑制了机体的多种机能。补充谷氨酰胺可以降低机体蛋白质分解水平,进一步优化体内氮平衡,防止肝脏受损[9.10]。3 中药提取物免疫抗应激研究及在水产养殖的应用中医药源远流长,经过几千年的积淀,梳理出许多具有提高免疫力、减缓环境刺激以及镇定安神类方药,杨仕群等[48]在中草药对肉牛运输应激研究中使用黄芪多糖、参苓白术散,有效减缓运输刺激对其体重、体温、呼吸和心率的变化,有一定的抗应激作用。刘惠君[49]等在酸枣仁汤对成人失眠研究中发现,中药提取物效果与安眠药相当,且中药提取物安全性好,无依赖性。封硕[50]在使用酸枣仁汤对小鼠行为影响试验中得出酸枣仁和茯苓起到明显镇定作用。夏婧等[51]在中药提取物酸枣仁对斑马鱼睡眠剥夺模型行为影响研究中发现,酸枣仁可调节神经递质受体的表达,且随着酸枣仁浓度增加,斑马鱼睡眠改善显著提升。
中医药防治失眠症自古以来就以其辨证施治的明显优势和良好疗效而受到重视,成为国内外研究的热点。代表方剂酸枣仁汤、天王补心丹 、安寐丹等,均以酸枣仁为君药滋阴养血、养心调神治疗不寐症。研究显示,酸枣仁活性成分可通过调节去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺( 5-HT) 、γ-氨基丁酸( GABA) 、一氧化氮( NO) 和谷氨酸(GLU)等神经递质作用达到改善睡眠的功效[52],来减少小鼠的自主活动次数、延长睡眠持续期、增加的入睡率从而发挥镇定催眠作用,并且副作用较小[53]。酸枣仁汤,原方出自汉代张仲景所著《伤寒杂病论》[54]。该方由酸枣仁、甘草、茯苓、
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复合中药提取物对褐篮子鱼生理代谢及抗氧化酶活性影响的研究知母、川芎五味药组成。主治虚劳虚烦、心悸、盗汗等肝阴虚型失眠[55]。近年来临床报道发现:酸枣仁汤在治疗失眠时应用十分广泛,不仅主治肝阴虚型失眠,很多其他证型的失眠也以酸枣仁汤为基础加减化裁,并且疗效显著[56,57]。具有镇定效果的中药提取物现已开发出药浴、内服 、肌注等多种剂型,具有方法简便,效果肯定,适应症广的优点[58,59]。中医药源远流长,以安全性好,无毒副作用见长,但中药提取物在水产养殖使用率较低,且多以饵料添加剂形式使用。现有研究表明,一些中草药对水产养殖鱼类具有较好的促生长作用,如姜志强等[60]在真鲷幼鱼生长研究中发现,山楂、当归等具有显著的促生长作用;王永玲等[61]通过大量研究发现 1%的大蒜能够促进鲫鱼的生长,提高其增重率;王春清等[62,63]在使用 0.1%中草药添加剂(大蒜素和杜仲)饲喂细鳞鱼 49 天后发现,可显著提高细鳞鱼的生长速度;谭娟等[64]在饲料中添加 2%剂量鱼腥草细粉后,在第 30 天、60 天和 90 天均可显著提高草鱼幼鱼的增重率。

3.1 中药提取物组方配伍
和传统化学药剂相比,中药提取物中的活性成分种类多,相对应的效应器官多且作用温和。试验所用中药提取物以酸枣仁汤为基础制成,组方为酸枣仁、茯苓、知母、川芎、五味子、山萸肉、甘草。酸枣仁养血补肝、宁心安神为君;茯苓利水渗湿、健脾和胃,知母宁心安神,滋阴清热为臣;川芎活血行气,祛风止痛,五味子收敛固涩、益气生津、补肾宁心,山萸肉补益肝肾,助酸枣仁养血调肝为佐;甘草健脾和中,调和诸药,为使药[65]。在镇定的同时,调理体内代谢平衡及预防体内器官功能异常。

3.2 各药物及其研究应用概况
3.1.1 酸枣仁
酸枣仁为鼠李科植物酸枣(Ziziphus jujuba Mill)的干燥成熟种子,《神农本草经》中记载,酸枣仁可“安五脏,轻身延年”,具有补肝、宁心、敛汗、生津等功效,是目前临床上治疗失眠的首选药物[66]。酸枣仁主要化学成分含有三萜皂苷类、黄酮类、生物碱、脂肪油等,其中,皂苷类成分是发挥镇定催眠作用的主要物质,能显著缩短小鼠的自主活动时间,降低其协调能力,并显著延长巴比妥钠诱导的睡眠时间,具有一定的镇定催眠作用;
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第一章 绪论
黄酮类主要有斯皮诺素和酸枣黄素,生物碱则有欧鼠李叶碱、荷叶碱、去甲荷叶碱、枣仁碱等;脂肪油是酸枣仁中含量最高的成分,以油酸和亚油酸不饱和脂肪酸为主[67]。现代药理研究显示,酸枣仁的药理活性研究一般集中在镇定催眠方面,但随着研究技术的发展,目前的研究热点已经延伸至抗焦虑、抗抑郁、抗炎、保护心血管系统、保肝和增强免疫等领域[68]。试验表明,酸枣仁活性成分可通过影响去 NE、DA、5-HT、GABA、NO 和 GLU等神经递质作用达到改善睡眠的功效[52]。研究发现,酸枣仁活性成分主要通过增强中枢GABA 能系统传递功能,产生镇定催眠、抗抑郁、抗焦虑等作用[69,70],GABA 也可通过与其他递质交互作用,间接参与睡眠、应激的调节和精神异常等行为和生理反应。
3.1.2 茯苓
茯苓是多孔菌科卧菌属真菌茯苓(Poria cocos (Schw.) Wolf.)的干燥菌核,《神农本草经》中记载,茯苓具有久服安魂养神的功效。茯苓性甘、淡、平 、入心 、脾 、肾经[66]。药理试验表明茯苓具有渗湿利尿、合胃健脾、宁心安神 、抑菌、增强机体抗病能力及降低血糖的功效[71-74]。茯苓主要化学成分含有多糖、三萜、脂肪酸、甾醇、酶等[75,76]。陈春霞等[77]采取羧甲基茯苓多糖对小鼠肝损伤进行治疗,最终发现羧甲基茯苓多糖对四氯化碳能够保护小鼠肝损害,可以降低血清谷-丙转氨酶活性,增强小鼠的肝切除后的再生能力;通过试验结果可以看出羧甲基茯苓多糖可以起到催眠作用,能够增强硫喷妥钠对小鼠中枢抑制作用,导致小鼠翻正反射消失时间进一步延长,也就是增强了镇定效果。李燕凌等[78]在对比茯苓多糖和 Vc 的体外抗氧化作用时,发现茯苓多糖具有较强的抗氧化能力。梁亦龙等[79]通过果蝇试验,验证了茯苓能提升果蝇超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)活性,降低其过氧化酶活性,茯苓对果蝇具有提升其抗氧化能力、抑制其脂质过氧化、延长其寿命的功效。
3.1.3 知母
知母是百合科知母属植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bungs.)的干燥根茎。《神农本草经》中记载,知母味苦、甘、寒,归肺、胃、肾经。具有清热泻火,滋阴润燥的功效[66]。知母中的化学成分以皂苷和黄酮为主,此外还有木脂素类、生物碱、有机酸类、挥发油和多糖类等化学成分[80]。王德洁等[81]在研究外界刺激引起的红细胞氧化溶血试验时发现,知母多糖对氧化溶血具有显著的抑制作用。日本学者 Takashi 等[82]在试验型糖尿病小鼠试验中使用知母多糖进行研究,发现知母多糖具有显著降血糖活性。李忌等[83]研究发现复合中药提取物对褐篮子鱼生理代谢及抗氧化酶活性影响的研究知母中的芒果苷成分对羟基自由基和超氧阴离子自由基具有显著的清除作用。崔岚等[84]研究表明,知母中的芒果苷成分清除羟基自由基的能力是甘露醇的 780 倍,抗脂质过氧化作用是维生素 E 的 1000 倍。佟连琨等85]发现,知母能显著降低甲亢阴虚大鼠细胞膜 Na+、K+-ATP 酶活力。
3.1.4 川芎
川芎是伞形科植物川芎(Ligusticum chuamiong Hort.)的根茎。《神农本草经》中记载,川芎“主中风入脑头痛,寒痹,筋挛缓急”[66]。川芎入药历史悠久,有活血行气、祛风止痛的功效[86,87],主要化学成分为川芎嗪、阿魏酸、多糖和酯类化合物等化合物[88-91]。现代药物研究发现,川芎能够扩张血管、清除机体氧自由基,对抗有害刺激引起的血管内皮细胞损伤[92]。接传红[93,94]、杨静等[95]研究表明,川芎有效成分可通过促进血管细胞增殖达到保护血管内皮细胞以及对抗损伤引起的活性氧上升,有效改善细胞的衰老状态。上述研究可见,川芎中存在多种具有对血管内皮细胞具有保护作用及抗氧化的成分。
3.1.5 五味子
五味子(Schisandra chinesis)为木兰科多年生落叶木质藤本植物,《神农本草经》中记载,五味子具有敛肺滋阴,敛汗生津,涩精止泻,宁心安神等功效[66]。五味子主要化学成分含有木脂素类、有机酸类、多糖类、苷类及其他成分等[96,97]。近年医药学研究表明,五味子有效成分可通过激活合成代谢过程来增强受损肝细胞的修复能力。具有保护心肌损伤、镇定催眠、抗氧化、提高免疫力和保肝的效果[98,99]。刘威等[100]在利用五味子乙素对缺氧/复氧损伤的乳鼠心肌细胞试验中得出,五味子乙素预处理组的细胞存活率明显高于模型组,乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性及 MDA 水平低于模型组,超氧化物歧化活性高于模型组,表明了五味子乙素对乳鼠缺氧/复氧损伤的心肌细胞具有保护作用,五味子乙素通过维持心肌细胞膜完整性、减少 LDH 和 CK 的外漏、提高 SOD 活性、减少MDA 的生成来减轻细胞氧化损伤。张胜娜等[101]发现五味子挥发油可以通过调节中枢神经系统,增强机体对非特异性刺激的防御能力。高家荣等[102]在对失眠大鼠模型中研究发现,五味子水提物可显著降低大鼠下丘脑内 DA 和 NE 含量,还可使 5-HT、白细胞介素-1β等含量明显增高,五味子水提物镇定催眠作用可能与调节单胺类神经递质有关。Li N 等[103]研究发现,五味子乙素可以显著提高小鼠外周血中 GABA 水平和降低谷氨酸水平,导致 γ-氨基丁酸/谷氨酸比例增加,通过上调 GABA A 受体的表达,调节外周血和脑组织中 GABA
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第一章 绪论
和谷氨酸的含有量,起到镇定催眠作用。皮子凤等[104]在对五味子木质素研究中发现,五味子乙素能抑制肝脏、脑脂质过氧化,具有清除自由基的能力。苗明三等[105]在小鼠免疫试验中使用五味子多糖,发现五味子多糖可显著提高巨噬细胞的吞噬能力,说明了五味子多糖具有免疫兴奋作用。Jiang Y M 等[106]在对五味子木质素研究中发现,五味子丙素、五味子醇乙能显著保护对乙酰氨基酚诱发的肝损伤。
3.1.6 山萸肉
山萸肉为山茱萸科植物山茱萸(Cornus officinalis Sieb. et Zucc.)的成熟果肉,《神农本草经》中记载,山萸肉具有补益肝肾、收涩固脱的功效[66],主要化学成分含有还原糖、多糖、有机酸、酚类、苷类、环烯醚萜苷、皂苷、鞣质等[107-109],目前针对山茱萸的研究主要集中在抗肿瘤、降血糖、保护心肌和肝脏等方面[110-112]。苗明三等[105]研究表明山茱萸多糖可显著提高衰老小鼠血清 SOD、CAT 活力, 显著降低血浆、脑匀浆及肝匀浆中的过氧化脂(LPO)水平,具有很好的抗衰老抗氧化作用。贾羲等[113]通过研究山茱萸对小鼠肺癌细胞试验,发现山茱萸提取物有显著抑制肿瘤细胞的增殖表现。张晓京等[114]通过研究心肌缺血小鼠灌注山茱萸多糖试验,发现 SOD 显著上升,MDA 水平、CK 含量显著下降,山茱萸多糖具有保心肌缺血损伤的作用。封晓鹏等[115]在探究山茱萸苷类有效成分对糖尿病型小鼠心肌干预试验中,发现心肌病变明显减轻,血糖明显下降,血清 SOD 和一氧化氮合酶(Nos)含量明显增加。表明山茱萸苷类可通过降低血糖类保护心肌。南美娟等[116]在对急性肝损伤小鼠试验中,发现使用山萸肉提取物后,小鼠血清中 MDA 含量明显降低,可以通过抗氧化应激有效减轻肝细胞坏死。
3.1.7 甘草
甘草为豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)胀果甘草(G.inflata Bat.)或光果甘草 (G.glabra L.)的干燥根及根茎,《神农本草经》中记载,具有补脾益气、清热解毒及调和诸药等功效,常作为“使药”在与各类寒热补泻药物同用,以协调寒热,平调升降,缓和药物烈性,减轻不良反应,并改善组方的疗效[66]。甘草的主要化学成分为三萜类、黄酮类,其他还有多糖类、香豆素类、氨基酸、生物碱类和有机酸类等,具有较广泛的生物活性[117]。Fukai[118]和 Villinski[119]分别使用甘草不同部位提取物进行了多种抗菌活性试验,试验发现对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、变形链球菌等均有抗菌活性。Wang等[120]以黄颡鱼为试验对象,投喂甘草提取物 60 天后进行柱状芽孢杆菌攻毒试验,发现添
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复合中药提取物对褐篮子鱼生理代谢及抗氧化酶活性影响的研究加组体液免疫反应显著增强。Chen 等[121]研究发现,甘草多糖能够缩短小鼠的生长周期,提高脾脏指数和胸腺指数。Ayeka 等[122]使用甘草多糖对小鼠进行抗癌活性试验中发现,甘草多糖能显著抑制肿瘤生长,具有免疫调节作用。

4 研究内容及意义
4.1 研究目的
随着我国社会经济水平不断提升,人们的生活水平也越来越高,消费需求持续丰富,对渔业资源的需求逐渐增加,而水产养殖领域是渔业资源最核心的供应渠道,整体规模也在不断扩大,水产养殖业正在经历量变到质变的过程,由资源扩张型向资源养护和综合利用型转变,环境友好和高效高品质渔业生产成为发展潮流。我国水产养殖从 2016 年的4793.2 万吨增长至 2020 年的 5224.2 万吨,年均复合增长率达 2.18%,我国拥有丰富的海洋和内陆水域资源,海岸线长度达到了 18,000 多公里,我国的渤海、黄海、东海和南海海域面积总计约为 473 万平方公里,水深 200 米以内的大陆架面积约 148 万平方公里,潮间带滩涂面积 1.9 万平方公里,10 米等深线以内的浅海 7.3 万平方公里。内陆水域面积约 17.6 万平方公里,湖泊、河流占内陆水域总面积的 81.2%,为水产养殖行业的发展创了先天有利条件。近年来,鱼类养殖越来越热,养殖对象与规模发生了较大的变化,整体养殖生产领域的集约化水平持续提高,而外界环境在不断发生变化,使得鱼类生长发育变得越来越缓慢、鱼类繁殖能力逐渐下降,同时发病率和死亡率不断提升,这些现象已经受到学术界的重视。鱼类产生应激反应的胁迫因子有很多,如物理因子(温度、盐度、光照、溶解气体等)、化学因子(农药、氨氮、重金属等)、生物因子(致病微生物、寄生虫)、其他(捕获、运输、个体竞争、饲养密度等)。因此,提升鱼体抗应激能力对渔业养殖有重大意义。镇定类药物可用于鱼的分类、计数、运输、标记、血液采样、病理分析、激素注射、疫苗接种、人工繁殖过程和手术期间的诱导镇定等方面,以尽量减少应激对鱼类的影响,例如摄食量减少、体表损伤和免疫功能等。麻醉剂除了能降低应激外自身也是一种应激源,会对鱼造成损伤。近年来水域富营养造成的藻类爆发性生长常见报告,褐篮子鱼是目前养殖较为普遍的篮子鱼种类,因其藻类摄食效率高,用于生态修复的研究越来越多,但褐篮子鱼抗应激能
 
第一章 绪论
力较弱,在外界环境刺激时反应强烈,背鳍迅速张开,高密度养殖时易互相扎伤形成体表损伤,且因其背鳍有毒,捕捞更易造成工作人员受伤。本研究以褐篮子鱼为研究对象,首先,初步研究了中药提取物对褐篮子鱼行为的影响,再者,以丁香酚和 MS-222 为对比,分析了中药提取物对褐篮子鱼代谢及免疫酶活力的影响,以期为中药提取物降低鱼类代谢及抗应激提供参考。
4.2 研究内容
分析中药提取物对褐篮子鱼的影响,本研究拟从以下方面进行:1.中药提取物对褐篮子鱼行为的影响:参照 Cooke 等[123]、Hikasa 等[124]和 Mcfarland 等[125]学者的分类标准。以目前水产养殖使用最多的药物丁香酚和 MS-222 作为对比,统计不同浓度中药提取物对褐篮子鱼各行为阶段起效时间及相对应浓度的成活率。2.中药提取物对褐篮子鱼生理代谢的影响研究:以目前水产养殖使用最多的药物丁香酚和 MS-222 作为对比,① 研究各药物不同浓度对褐篮子鱼代谢的影响,检测 1.5h 时耗氧率和排氨率,分析各药物浓度下褐篮子鱼耗氧率和排氨率的变化规律及适用。② 在各药物适宜浓度下进行 4h 连续试验和 1h 复苏试验,连续试验分别在 1/4h、1h、2h、3h、4h 时测定褐篮子鱼耗氧率和排氨率,复苏试验分别在 1/6h、1/2h、1h 时测定褐篮子鱼耗氧率和排氨率,分析三种药物在连续试验及复苏试验中对褐篮子鱼代谢的影响。
3.中药提取物对褐篮子鱼免疫酶活性的研究:在上述试验所得三种药物适用下对褐篮子鱼进行试验,检测 1/4h、1h、2h、3h、4h 时血清过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶活性,旨在研究在不同药物作用下褐篮子鱼相关抗氧化酶活力的变化规律。
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